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ISSN 1001-5256
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NLRP3炎性体在胆总管结扎诱导的肝纤维化大鼠模型中的表达特点

周蒙恩 陈懿榕 张娜 晏旎 阙任烨 李勇

周蒙恩, 陈懿榕, 张娜, 等. NLRP3炎性体在胆总管结扎诱导的肝纤维化大鼠模型中的表达特点[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(9): 2102-2108. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.09.020
引用本文: 周蒙恩, 陈懿榕, 张娜, 等. NLRP3炎性体在胆总管结扎诱导的肝纤维化大鼠模型中的表达特点[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(9): 2102-2108. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.09.020
ZHOU ME, CHEN YR, ZHANG N, et al. Expression of NLRP3 inflammatory body in a rat model of liver fibrosis induced by common bile duct ligation [J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(9): 2102-2108. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.09.020
Citation: ZHOU ME, CHEN YR, ZHANG N, et al. Expression of NLRP3 inflammatory body in a rat model of liver fibrosis induced by common bile duct ligation [J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(9): 2102-2108. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.09.020

NLRP3炎性体在胆总管结扎诱导的肝纤维化大鼠模型中的表达特点

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.09.020
基金项目: 

国家自然科学基金资助项目 81573775

国家自然科学基金资助项目 81873157

详细信息
    通讯作者:

    李勇,liyong8256@126.com

  • 中图分类号: R575.2

Expression of NLRP3 inflammatory body in a rat model of liver fibrosis induced by common bile duct ligation

Funds: 

National Natural Science Foundation of China 81573775

National Natural Science Foundation of China 81873157

  • 摘要:   目的  探讨NLRP3炎性体在胆总管结扎(BDL)大鼠肝纤维化过程中的表达特点,探索NLRP3炎性体与肝纤维化的关系。  方法  将65只SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、BDL模型组(n=50)。分别于第3、7、14、21、28天,处死10只模型组大鼠,同时处死3只假手术组大鼠。检测血清ALT、AST、DBil、TBil、TBA、ALP水平,对肝组织行HE、Masson、天狼星红-苦味酸染色,评估各组肝纤维化程度,免疫组化检测肝组织α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、TGFβ1的表达水平,Western Blot、qRT-PCR检测肝组织NLRP3炎性体的表达水平,ELISA法检测肝组织炎症IL-1β水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  与假手术组比较,各BDL模型组大鼠血清ALT、AST、DBil、TBil、TBA、ALP水平均升高(P值均<0.05),肝组织IL-1β水平均升高(P值均<0.05),并于第3天达到最高,其后有所降低。与假手术组比较,随时间延长,BDL大鼠模型肝纤维化评分明显增加(P值均<0.05),免疫组化显示αSMA、TGFβ1表达逐渐增加(P值均<0.05),Western Blot、qRT-PCR显示肝组织NLRP3炎性体蛋白表达逐渐增加(P值均<0.05),并于第14天后保持稳定。  结论  BDL大鼠模型肝功能损伤持续存在,肝组织病理学存在肝炎-肝纤维化-肝硬化的动态演变,NLRP3炎性体处于持续活化状态,可能在肝纤维化过程中发挥重要作用。

     

  • 图  1  大鼠肝脏组织HE染色(×200)

    注:a,假手术组; b,BDL 3 d; c,BDL 7 d; d,BDL 14 d; e,BDL 21 d; f,BDL 28 d。

    图  2  大鼠肝脏组织Masson染色(×200)

    注:a,假手术组; b,BDL 3 d; c,BDL 7 d; d,BDL 14 d; e,BDL 21 d; f,BDL 28 d。

    图  3  大鼠肝脏组织苦味酸-天狼星染色(×200)

    注:a,假手术组; b,BDL 3 d; c,BDL 7 d; d,BDL 14 d; e,BDL 21 d; f,BDL 28 d。

    图  4  免疫组化检测αSMA在大鼠肝组织中的表达(×200)

    注:a,假手术组; b,BDL 3 d; c,BDL 7 d; d,BDL 14 d; e,BDL 21 d; f,BDL 28 d。

    图  5  免疫组化检测TGFβ1在大鼠肝组织中的表达(×200)

    注:a,假手术组; b,BDL 3 d; c,BDL 7 d; d,BDL 14 d; e,BDL 21 d; f,BDL 28 d。

    图  6  大鼠肝组织NLRP3炎性体蛋白表达情况

    表  1  各组大鼠血清AST、ALT、ALP、DBil、TBA、TBil指标比较

    组别 动物数(只) AST(U/L) ALT(U/L) ALP(U/L) DBil(μmol/L) TBA(μmol/L) TBil(μmol/L)
    假手术组 15 91.05±6.68 30.60±13.03 169.70±37.65 0.07±0.08 16.68±5.25 0.42±0.13
    BDL3 d 10 808.80±159.91) 154.00±63.771) 666.40±139.701) 141.60±24.221) 383.60±185.101) 151.60±32.611)
    BDL7 d 10 233.10±11.861)2) 31.40±5.681)2) 388.20±74.171)2) 61.66±15.401)2) 122.30±19.511)2) 71.51±16.261)2)
    BDL14 d 10 234.20±12.081)2) 25.10±9.191)2) 347.70±63.381)2) 70.42±25.001)2) 136.20±26.021)2) 72.78±24.281)2)
    BDL21 d 10 237.90±9.621)2) 41.10±12.111)2) 408.40±61.851)2) 74.14±11.051)2) 140.00±21.651)2) 77.21±22.151)2)
    BDL28 d 10 237.30±9.711)2) 63.10±23.871)2)4) 466.80±109.001)2)4) 84.19±13.661)2) 141.50±73.971)2) 88.96±9.931)2)3)
    F 170.9 31.49 43.92 94.50 26.54 71.10
    P <0.01 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01
    注:与假手术组相比,1)P<0.05;与BDL3 d相比,2)P<0.05;与BDL7 d相比,3)P<0.05; 与BDL14 d相比,4)P<0.05。
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    表  2  免疫组化半定量及肝纤维化评分

    组别 动物数(只) αSMA表达强度(IOD/area)×100 TGFβ1表达强度(IOD/area)×100 肝纤维化评分
    假手术组 15 1.16±0.42 1.05±0.38 0.00±0.00
    BDL3 d 10 1.75±0.73 1.59±0.57 1.30±0.671)
    BDL7 d 10 4.04±0.771)2) 4.35±1.071)2) 2.30±0.951)2)
    BDL14 d 10 5.99±0.781)2)3) 6.70±0.991)2)3) 3.60±1.171)2)3)
    BDL21 d 10 7.12±0.611)2)3)4) 7.92±1.381)2)3)4) 4.80±1.401)2)3)4)
    BDL28 d 10 8.31±1.761)2)3)4)5) 9.11±1.551)2)3)4)5) 5.10±1.201)2)3)4)
    F 114.60 118.90 51.41
    P <0.01 <0.01 <0.01
    注:与假手术组相比,1)P<0.05;与BDL3 d相比,2)P<0.05;与BDL7 d相比,3)P<0.05; 与BDL14 d相比,4)P<0.05;与BDL21 d相比,5)P<0.05。
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    表  3  NLRP3炎性体蛋白表达

    组别 动物数(只) NLRP3(NLRP3/β-actin) ASC(ASC/β-actin) caspase1(caspase1/β-actin)
    假手术组 15 1 1 1
    BDL3 d 10 1.18±0.07 1.78±0.121) 1.74±0.141)
    BDL7 d 10 1.60±0.171)2) 2.18±0.151)2) 2.35±0.131)2)
    BDL14 d 10 2.07±0.141)2)3) 2.71±0.171)2)3) 2.80±0.161)2)3)
    BDL21 d 10 2.21±0.161)2)3) 2.76±0.181)2)3) 2.82±0.161)2)3)
    BDL28 d 10 2.24±0.131)2)3) 2.78±0.161)2)3) 2.78±0.171)2)3)
    F 55.90 73.89 89.55
    P <0.01 <0.01 <0.01
    注:与假手术组相比,1)P<0.05;与BDL3 d相比,2)P<0.05;与BDL7 d相比,3)P<0.05。
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    表  4  NLRP3炎性体mRNA表达

    组别 动物数(只) NLRP3(NLRP3/β-actin) ASC(ASC/β-actin) caspase1(caspase1/β-actin)
    假手术组 15 1 1 1
    BDL3 d 10 1.73±0.181) 1.59±0.221) 1.52±0.191)
    BDL7 d 10 2.16±0.321)2) 2.12±0.291)2) 1.80±0.241)2)
    BDL14 d 10 3.03±0.321)2)3) 2.74±0.291)2)3) 2.61±0.241)2)3)
    BDL21 d 10 2.97±0.231)2)3) 2.78±0.231)2)3) 2.71±0.241)2)3)
    BDL28 d 10 3.03±0.181)2)3) 2.79±0.201)2)3) 2.77±0.191)2)3)
    F 177.50 141.20 173.00
    P <0.01 <0.01 <0.01
    注:与假手术组相比,1)P<0.05;与BDL3 d相比,2)P<0.05;与BDL7 d相比,3)P<0.05。
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    表  5  各组肝组织IL-1β水平

    组别 动物数(只) IL-1β(pg/mg)
    假手术组 15 45.81±4.77
    BDL3 d 10 139.90±18.381)
    BDL7 d 10 55.83±10.251)2)
    BDL14 d 10 79.76±12.921)2)3)
    BDL21 d 10 70.52±8.621)2)3)
    BDL28 d 10 100.60±8.691)2)3)4)5)
    F 106.10
    P <0.01
    注:与假手术组相比,1)P<0.05;与BDL3 d相比,2)P<0.05;与BDL7 d相比,3)P<0.05;与BDL14 d相比,4)P<0.05;与BDL21 d相比,5)P<0.05。
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  • 收稿日期:  2021-02-18
  • 修回日期:  2021-03-15
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