高敏PCR在HBV极低病毒载量的慢性乙型肝炎患者中检测的临床意义

邱功钦; 谢丹; 陈姿任; 欧阳石

doi:10.12449/JCH240308

高敏PCR在HBV极低病毒载量的慢性乙型肝炎患者中检测的临床意义

DOI: 10.12449/JCH240308

邱功钦^{a, b},
谢丹^{a, b},
陈姿任^{a, b},
欧阳石^{a, b, , ,}

a.
广州医科大学附属第五医院感染性疾病科，广州 510000
b.
广州医科大学附属第五医院广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室，广州 510000

基金项目:

国家自然科学基金 (81803884);

广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室 (2021KSYS009);

广州市医学重点学科项目（2021—2023年） ;

本科生创新能力提升计划项目 (2022JXA003);

广州医科大学科研能力提升项目 (02-410-2302092XM);

2022年广州医科大学学科建设项目 (02-410-2206013);

2023年市校（院）企联合资助项目 (2023A03J0421);

2023年北京肝胆相照公益基金会资助项目 (iGandanF-1082023-RGG023)

伦理学声明：本研究方案于2023年3月28日经由广州医科大学附属第五医院伦理委员会审批，批号：GYWY-L2023-60。

利益冲突声明：本研究不存在任何利益冲突。

作者贡献声明：邱功钦负责数据收集及分析，撰写论文，修改论文；谢丹、陈姿任负责修改和校对论文；欧阳石负责研究设计，拟定写作思路，指导撰写文章并最后定稿。

详细信息

通信作者:
欧阳石， ouyangshi@gzhmu.edu.cn （ORCID： 0000-0003-0173-3276）

计量
- 文章访问数: 218
- HTML全文浏览量: 71
- PDF下载量: 47
- 被引次数: 0
出版历程
- 收稿日期: 2023-06-28
- 录用日期: 2023-09-11
- 出版日期: 2024-03-20

Significance of high-sensitivity polymerase chain reaction in detecting hepatitis B virus in chronic hepatitis B patients with a very low viral load

Gongqin QIU^{a, b},
Dan XIE^{a, b},
Ziren CHEN^{a, b},
Shi OUYANG^{a, b
, ,
,}

a.
Department of Infectious Diseases, Therapy and Rehabilitation of Guangdong Higher Education Institutes，Guangzhou 510000，China）
b.
Key Laboratory of Biological Targeting Diagnosis，Therapy and Rehabilitation of Guangdong Higher Education Institutes，Guangzhou 510000，China

Research funding:

National Natural Science Foundation of China (81803884);

The Key Laboratory of Guangdong Higher Education Institutes (2021KSYS009);

The Key Medical Disciplines of Guangzhou Project （2021‍ ‍—‍ ‍2023） ;

Undergraduate Innovation Ability Enhancement Program Project (2022JXA003);

Plan on Enhancing Scientific Research in GMU (02-410-2302092XM);

2022 Guangzhou Medical University Discipline Construction Projects (02-410-2206013);

2023 City School （College） Enterprise Joint Funding Projects (2023A03J0421);

The 2023 Artificial Liver Special Fund (iGandanF-1082023-RGG023)

More Information

Corresponding author: OUYANG Shi， ouyangshi@gzhmu.edu.cn （ORCID： 0000-0003-0173-3276）

摘要

摘要: 目的探讨使用高敏PCR在HBV极低病毒载量（HBV DNA 10～99 IU/mL）人群检测中的意义。方法选取2019年9月—2022年2月在广州医科大学附属第五医院接受核苷（酸）类似物（NAs）治疗≥48周且经普敏HBV DNA检测（检测下限100 IU/mL）结果为低于检测下限的慢性乙型肝炎（CHB）患者，进一步行高敏HBV DNA检测（检测下限10 IU/mL），根据结果分为极低病毒载量（VLVL，HBV DNA 10～99 IU/mL）组和完全病毒学应答（CVR，HBV DNA<10 IU/mL或未检测到）组。比较两组患者的一般特征、血清病毒学指标、生化学指标、无创肝纤维化指标，评价相关血清病毒学指标对高敏HBV DNA高于检测下限的预测价值，并探讨未实现CVR的影响因素。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验；非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ²检验或Fisher精确检验。采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价相关血清病毒学指标对高敏HBV DNA高于检测下限的预测价值。采用二元Logistic回归分析探讨未实现CVR的影响因素。结果共纳入106例CHB患者，其中VLVL组24例、CVR组82例。VLVL组年龄小于CVR组（P=0.004），VLVL组qHBsAg水平（P=0.002）、HBeAg阳性率（P=0.002）、pgRNA阳性率（P=0.010）及ALT水平（P=0.017）高于CVR组。qHBsAg水平预测CHB患者采用高敏HBV DNA检查结果高于检测下限（>10 IU/mL）的ROC曲线下面积为0.717（P=0.002），最佳cut-off值为1 214.5 IU/mL，敏感度为95.5%，特异度为53.9%。HBeAg阳性（OR=3.654，95%CI：1.162～11.489，P=0.027）和qHBsAg（OR=2.985，95%CI：1.058～8.422，P=0.039）是未实现CVR的独立影响因素。结论 CHB患者经普敏检测HBV DNA低于<100 IU/mL，但经高敏PCR检测实际仍存在VLVL。VLVL患者炎症损伤水平、pgRNA阳性率以及HBeAg阳性率均显著高于CVR者。HBeAg阳性和高qHBsAg水平是CHB患者未实现CVR的独立影响因素。临床医师不应忽视CHB患者中VLVL人群，需及时行高敏HBV DNA检测。
- 乙型肝炎，慢性 /
- 聚合酶链反应 /
- 极低病毒载量
Abstract: Objective To investigate the significance of high-sensitive polymerase chain reaction （PCR） in detecting hepatitis B virus （HBV） among the population with a very low viral load （HBV DNA 10‍ — ‍99 IU/mL）. Methods This study was conducted among the chronic hepatitis B （CHB） patients who were treated with nucleos（t）ide analogues for ≥48 weeks in The Fifth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University from September 2019 to February 2022 and had an HBV DNA load below the lower limit of ordinary-sensitivity detection （100 IU/mL）. Then high-sensitivity HBV DNA detection was performed for all patients， and according to these results， the patients were divided into very low viral load group （VLVL group with an HBV DNA load of 10‍ — ‍99 IU/mL） and complete virologic response group （CVR group with an HBV DNA load of <10 IU/mL or without HBV DNA detected）. The two groups were compared in terms of general characteristics， serum virological indicators， biochemical parameters， and noninvasive fibrosis markers； the value of related serum virological indicators in predicting the results of high-sensitivity HBV DNA above the lower limit of detection were assessed； the influencing factors for failure to achieve CVR were analyzed. The independent-samples t test was used for comparison of normally distributed continuous data between two groups， and the Mann-Whitney U test was used for comparison of non-normally distributed continuous data between two groups； the chi-square test or the Fisher’s exact test was used for comparison of categorical data between two groups. The receiver operating characteristic （ROC） curve was used to investigate the value of related serum virological indicators in predicting the results of high-sensitivity HBV DNA above the lower limit of detection， and a binary logistic regression analysis was used to investigate the influencing factors for failure to achieve CVR. Results A total of 106 CHB patients were enrolled， with 24 in the VLVL group and 82 in the CVR group. Compared with the CVR group， the VLVL group had a significantly younger age （P=0.004） and significantly higher quantitative hepatitis B surface antigen （qHBsAg） level （P=0.002）， HBeAg positive rate （P=0.002）， pgRNA positive rate （P=0.010）， and alanine aminotransferase level （P=0.017）. The qHBsAg level had an area under the ROC curve of 0.717 （P=0.002） in predicting the results of high-sensitivity HBV DNA above the lower limit of detection （>10 IU/mL）， with an optimal cut-off value of 1 214.5 IU/mL， a sensitivity of 95.5%， and a specificity of 53.9%. Positive HBeAg （odds ratio ［OR］=3.654， 95% confidence interval ［CI］： 1.162‍ —‍ ‍11.489， P=0.027） and qHBsAg （OR=2.985， 95%CI： 1.058‍ — ‍8.422， P=0.039） were independent influencing factors for failure to achieve CVR. Conclusion Some CHB patients have an HBV DNA load of <100 IU/mL by ordinary-sensitivity detection， but with the presence of VLVL determined by high-sensitivity PCR. The VLVL group had significantly higher level of inflammatory damage and positive rates of pgRNA and HBeAg. Positive HBeAg and high qHBsAg level are independent influencing factors for failure to achieve CVR. Clinicians should not ignore the presence of VLVL in CHB patients， and high-sensitivity HBV DNA detection should be performed in a timely manner.
- Hepatitis B， Chronic /
- Polymerase Chain Reaction /
- Very Low Viral Load

HTML全文

图 1 qHBsAg水平预测高敏HBV DNA高于检测下限的ROC曲线

Figure 1. ROC curve of qHBsAg titer prediction for highly sensitive HBV DNA above the lower detection limit

下载: 全尺寸图片幻灯片

表 1 VLVL组和CVR组一般资料比较

Table 1. Comparison of general characteristics between VLVL group and CVR group

指标	总计（n=106）	VLVL组（n=24）	CVR组（n=82）	统计值	P值
年龄（岁）	33.0（27.8～42.0）	30.0（26.0～32.8）	35.0（29.0～45.0）	Z=2.892	0.004
性别［例（%）］				χ²=0.167	0.683
女	30（28.3）	6（25.0）	24（29.3）
男	76（71.7）	18（75.0）	58（70.7）
BMI（kg/m²）	21.9（19.7～24.0）	21.9（20.2～23.9）	21.9（19.6～24.1）	Z=0.183	0.855
乙型肝炎肝硬化［例（%）］				χ²=1.310	0.252
是	14（13.2）	1（4.2）	13（15.9）
否	92（86.8）	23（95.8）	69（84.1）
NAs治疗时长（年）	2.7（1.7～4.4）	2.4（1.2～3.2）	2.7（1.7～4.5）	Z=1.638	0.101

下载: 导出CSV

表 2 VLVL组和CVR组临床特征比较

Table 2. Comparison of clinical characteristics between VLVL group and CVR group

指标	总计（n=106）	VLVL组（n=24）	CVR组（n=82）	统计值	P值
血清生化学指标
ALT（U/L）	19.8（16.2～30.5）	30.5（18.8～43.3）	19.6（15.0～28.1）	Z=2.388	0.017
AST（U/L）	21.2（17.4～25.6）	22.2（17.4～29.9）	20.9（17.4～24.8）	Z=1.018	0.309
TBil（μmol/L）	11.3（8.5～18.0）	10.4（8.2～13.2）	11.7（8.6～18.4）	Z=0.843	0.399
AFP（ng/mL）	2.7（2.1～3.4）	2.9（2.0～3.3）	2.7（2.1～3.5）	Z=0.114	0.909
肌酐（μmol/L）	80.3±16.8	85.2±15.6	79.0±17.0	t=1.520	0.136
总胆固醇（mmol/L）	4.2±0.8	4.2±0.6	4.2±0.9	t=0.050	0.961
TG（mmol/L）	1.0（0.8～1.5）	1.0（0.6～1.4）	1.0（0.9～1.5）	Z=0.562	0.574
HDL（mmol/L）	1.1（1.0～1.3）	1.1（1.0～1.3）	1.0（1.0～1.3）	Z=0.433	0.665
LDL（mmol/L）	2.6±0.6	2.6±0.4	2.6±0.7	t=0.103	0.918
无创肝纤维化指标
LSM（kPa）	7.2（6.3～7.8）	7.1（6.6～7.8）	7.2（6.2～7.8）	Z=0.460	0.646
FIB-4评分	0.6（0.5～0.9）	0.5（0.4～0.6）	0.7（0.5～1.0）	Z=3.519	<0.001
APRI评分	0.2（0.2～0.3）	0.2（0.2～0.3）	0.2（0.2～0.3）	Z=0.500	0.617
血清病毒学指标
qHBsAg（IU/mL）	1 397.5（611.2～4 112.8）	2 572.5（1 672.8～5 890.5）	1 123.5（378.7～3 833.0）	Z=3.082	0.002
HBeAg［例（%）］				χ²=9.642	0.002
阳性	50（47.2）	18（75.0）	32（39.0）
阴性	56（52.8）	6（25.0）	50（61.0）
pgRNA［例（%）］^1）				χ²=6.603	0.010
阳性	28（53.8）	11（84.6）	17（43.6）
阴性	24（46.2）	2（15.4）	22（56.4）
注：1），pgRNA检测共52例。

下载: 导出CSV

表 3 二元Logistic回归分析未实现CVR的影响因素

Table 3. Binary Logistic regression analysis of influencing factors of incomplete virology response

项目	β值	SE	Wald	P值	OR	95%CI
HBeAg阳性	1.296	0.584	4.915	0.027	3.654	1.162～11.489
qHBsAg（log₁₀IU/mL）	1.094	0.529	4.270	0.039	2.985	1.058～8.422
常量	-5.587	1.799	9.647	0.002	0.004

下载: 导出CSV

参考文献(25)

[1]	World Health Organization. Hepatitis B[EB/OL].( 2022-6-24)[ 2022-07-15]. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b
[2]	Chinese Society of Hepatology, Chinese Medical Association; Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical Association. Guidelines for the prevention and treatment of chronic hepatitis B(2022 version)[J]. Chin J Infect Dis, 2023, 41( 1): 3- 28. DOI: 10.3760/cma.j.cn311365-20230220-00050. 中华医学会肝病学分会, 中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南(2022年版)[J]. 中华传染病杂志, 2023, 41( 1): 3- 28. DOI: 10.3760/cma.j.cn311365-20230220-00050.
[3]	TERRAULT NA, LOK A, MCMAHON BJ, et al. Update on prevention, diagnosis, and treatment of chronic hepatitis B: AASLD 2018 hepatitis B guidance[J]. Hepatology, 2018, 67( 4): 1560- 1599. DOI: 10.1002/hep.29800.
[4]	European Association for the Study of the Liver. EASL 2017 Clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection[J]. J Hepatol, 2017, 67( 2): 370- 398. DOI: 10.1016/j.jhep.2017.03.021.
[5]	LU FM, FENG B, ZHENG SJ, et al. Current status of the research on low-level viremia in chronic hepatitis B patients receiving nucleos(t)ide analogues[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37( 6): 1268- 1274. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.06.007. 鲁凤民, 封波, 郑素军, 等. 核苷(酸)类似物经治的慢性乙型肝炎患者低病毒血症的研究现状[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37( 6): 1268- 1274. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.06.007.
[6]	KIM HJ, CHO YK, JEON WK, et al. Clinical characteristics of patients with chronic hepatitis B who developed genotypic resistance to entecavir: Real-life experience[J]. Clin Mol Hepatol, 2017, 23( 4): 323- 330. DOI: 10.3350/cmh.2017.0005.
[7]	HUANG YJ, YANG SS, YEH HZ, et al. Association of virological breakthrough and clinical outcomes in entecavir-treated HBeAg-positive chronic hepatitis B[J]. PLoS One, 2019, 14( 8): e0221958. DOI: 10.1371/journal.pone.0221958.
[8]	HUANG YJ, CHANG CS, PENG YC, et al. On-treatment HBV DNA dynamics predict virological breakthrough in entecavir-treated HBeAg-positive chronic hepatitis B[J]. PLoS One, 2017, 12( 3): e0174046. DOI: 10.1371/journal.pone.0174046.
[9]	SUN Y, WU X, ZHOU J, et al. Persistent low level of hepatitis B virus promotes fibrosis progression during therapy[J]. Clin Gastroenterol Hepatol, 2020, 18( 11): 2582- 2591. DOI: 10.1016/j.cgh.2020.03.001.
[10]	ZHANG Q, PENG H, LIU X, et al. Chronic hepatitis B infection with low level viremia correlates with the progression of the liver disease[J]. J Clin Transl Hepatol, 2021, 9( 6): 850- 859. DOI: 10.14218/JCTH.2021.00046.
[11]	KIM JH, SINN DH, KANG W, et al. Low-level viremia and the increased risk of hepatocellular carcinoma in patients receiving entecavir treatment[J]. Hepatology, 2017, 66( 2): 335- 343. DOI: 10.1002/hep.28916.
[12]	KIM TS, SINN DH, KANG W, et al. Hepatitis B virus DNA levels and overall survival in hepatitis B-related hepatocellular carcinoma patients with low-level viremia[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2019, 34( 11): 2028- 2035. DOI: 10.1111/jgh.14750.
[13]	Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical Association; Chinese Society of Hepatology, Chinese Medical Association. Guidelines for the prevention and treatment of chronic hepatitis B(version 2019)[J]. J Clin Hepatol, 2019, 35( 12): 2648- 2669. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.12.007. 中华医学会感染病学分会, 中华医学会肝病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)[J]. 临床肝胆病杂志, 2019, 35( 12): 2648- 2669. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.12.007.
[14]	JIANG ML, XU F, ZHANG LL. Liver inflammation and fibrosis in HBV-infected patients with a low viral load[J]. J Clin Hepatol, 2023, 39( 6): 1304- 1307. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.06.008. 姜曼蕾, 许飞, 张伦理. 低病毒载量HBV感染者肝脏炎症及纤维化情况分析[J]. 临床肝胆病杂志, 2023, 39( 6): 1304- 1307. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.06.008.
[15]	HAN YL. Clinical characteristics analysis of hepatitis B related primary liver cancer patients with low viral load[D]. Yanji: Yanbian University, 2022. 韩艺蕾. 低病毒载量的乙型肝炎相关原发性肝癌患者临床特征分析[D]. 延吉: 延边大学, 2022.
[16]	DUAN M, CHI X, XIAO H, et al. High-normal alanine aminotransferase is an indicator for liver histopathology in HBeAg-negative chronic hepatitis B[J]. Hepatol Int, 2021, 15( 2): 318- 327. DOI: 10.1007/s12072-021-10153-2.
[17]	SONNEVELD MJ, BROUWER WP, HANSEN BE, et al. Very low probability of significant liver inflammation in chronic hepatitis B patients with low ALT levels in the absence of liver fibrosis[J]. Aliment Pharmacol Ther, 2020, 52( 8): 1399- 1406. DOI: 10.1111/apt.16067.
[18]	LI YP, LI CY, CHEN YP. Research advances in clinicopathological features of patients with chronic HBV infection and normal alanine aminotransferase level[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33( 8): 1568- 1571. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2017.08.034. 李艳平, 李春艳, 陈延平. ALT正常的慢性HBV感染者临床病理特征[J]. 临床肝胆病杂志, 2017, 33( 8): 1568- 1571. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2017.08.034.
[19]	LI Q, HUANG YX, CHEN L. Independent predictive factors for significant liver histological changes in patients with HBeAg-positive high-viral-load chronic HBV infection and a normal alanine aminotransferase level[J]. J Clin Hepatol, 2016, 32( 7): 1310- 1314. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2016.07.019. 李强, 黄玉仙, 陈良. ALT正常的HBeAg阳性高病毒载量慢性HBV感染者明显肝组织学改变的独立预测因素[J]. 临床肝胆病杂志, 2016, 32( 7): 1310- 1314. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2016.07.019.
[20]	GU JL, LIU SS, LI CF, et al. Value of highly sensitive serum virological markers in hepatitis B patients with a low viral load[J]. J Clin Hepatol, 2018, 34( 6): 1302- 1307. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2018.06.037. 谷九莲, 刘守胜, 李昌飞, 等. 高灵敏度血清病毒学指标检测在低病毒载量乙型肝炎人群中的应用价值[J]. 临床肝胆病杂志, 2018, 34( 6): 1302- 1307. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2018.06.037.
[21]	WANG YT, CUI XR, FAN B, et al. Research progress on the integration of hepatitis B virus DNA and the occurrence and development of hepatocellular carcinoma[J]. J Clin Exp Med, 2022, 21( 7): 781- 785. DOI: 10.3969/j.issn.1671-4695.2022.07.030. 王宇涛, 崔骁睿, 范博, 等. 乙型肝炎病毒DNA整合与肝细胞癌发生发展的研究进展[J]. 临床和实验医学杂志, 2022, 21( 7): 781- 785. DOI: 10.3969/j.issn.1671-4695.2022.07.030.
[22]	TESTONI B, LEBOSSÉ F, SCHOLTES C, et al. Serum hepatitis B core-related antigen(HBcrAg) correlates with covalently closed circular DNA transcriptional activity in chronic hepatitis B patients[J]. J Hepatol, 2019, 70( 4): 615- 625. DOI: 10.1016/j.jhep.2018.11.030.
[23]	CHEN EQ, WANG ML, TAO YC, et al. Serum HBcrAg is better than HBV RNA and HBsAg in reflecting intrahepatic covalently closed circular DNA[J]. J Viral Hepat, 2019, 26( 5): 586- 595. DOI: 10.1111/jvh.13061.
[24]	LI H, XU WT, DENG BC, et al. Research progress on functional cure of chronic hepatitis B by nucle(t)side analogues combined with Peginterferon[J]. Clin J Med Offic, 2022, 50( 9): 890- 893. DOI: 10.16680/j.1671-3826.2022.09.04. 李卉, 许文涛, 邓宝成, 等. 核苷(酸)类似物联合聚乙二醇干扰素功能性治愈慢性乙型肝炎研究进展[J]. 临床军医杂志, 2022, 50( 9): 890- 893. DOI: 10.16680/j.1671-3826.2022.09.04.
[25]	YANG RF, CHEN HS, LU FM, The new demand for HBV Nucleic acid test method in current chronic hepatitis B treatment practice[J]. China Clin New Med, 2021, 14( 1): 1- 7. DOI: 10.3969/j.issn.1674-3806.2021.01.01. 杨瑞锋, 陈红松, 鲁凤民. 当今慢性乙型肝炎治疗实践对HBV核酸检测方法的新需求[J]. 中国临床新医学, 2021, 14( 1): 1- 7. DOI: 10.3969/j.issn.1674-3806.2021.01.01.