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补体应答基因32在小鼠部分肝切除后肝再生过程中的表达及意义

李兴元 杨艳芳 陈琰 胡文慧 赵小英 唐俊明 孔德营

引用本文:
Citation:

补体应答基因32在小鼠部分肝切除后肝再生过程中的表达及意义

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.10.018
基金项目: 

国家自然科学基金 (31760339);

湖北省教育厅科学研究计划资助项目 (Q20212107);

贵州省科技计划项目 (Qiankehe Foundation-ZK [2022] General 594)

伦理学声明:本研究方案于2021年12月5日经由湖北医药学院实验动物伦理委员会审批,批号:2021-实071号,符合实验室动物管理与使用准则。
利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:孔德营、唐俊明负责课题设计;李兴元、杨艳芳、陈琰、胡文慧参与动物模型的构建;李兴元、杨艳芳负责做实验、整理数据及撰写论文;赵小英负责对论文进行修改;李兴元和杨艳芳对本文贡献等同,同为第一作者。
详细信息
    通信作者:

    孔德营, vsysongyer@126.com (ORCID: 0000-0002-6851-955X)

Expression and significance of response gene to complement 32 in liver regeneration after partial hepatectomy in mice

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (31760339);

Scientific Research Program of Education Department of Hubei Province (Q20212107);

Guizhou Provincial Science and Technology Plan Project (Qiankehe Foundation-ZK [2022] General 594)

More Information
    Corresponding author: KONG Deying, vsysongyer@126.com (ORCID: 0000-0002-6851-955X)
  • 摘要:   目的  探讨补体应答基因32(RGC32)在部分肝切除(PH)术后肝再生过程中的表达及作用。  方法  42只10周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组[切除小鼠完整的肝脏称重、拍照作为正常对照(sham组),进一步切除肝左叶和肝中叶后称重、拍照作为手术对照(0 d组),sham组和0 d组共用一组小鼠]、术后1天组(1 d)、术后2天组(2 d)、术后4天组(4 d)、术后6天组(6 d)、术后8天组(8 d)和术后10天组(10 d),每组6只;PH术建模成功后分别于术后1、2、4、6、8、10天处死小鼠,收集小鼠肝脏,检测肝脏大小变化。HE和油红O染色评估肝组织形态学变化,血清ALT、AST检测评价肝功能变化,免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67表达并分析肝再生过程中细胞增殖变化,实时荧光定量PCR和免疫组化染色技术检测肝再生过程中RGC32的表达及其亚细胞分布。EdU细胞增殖实验分析L02细胞过表达或者敲除RGC32对肝细胞增殖的影响。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;两组间比较采用成组t检验。相关性分析采用Pearson相关分析法。  结果  PH术后肝脏逐渐增大,第0~6天为肝体比(肝脏质量/体质量)上升的高峰期,不同时间点比较差异均有统计学意义(P值均<0.05);第6~10天肝脏大小变化不明显。PH术后肝脏脂滴显著增多,随着肝再生,脂滴减少,且呈现门静脉区和中央静脉区差异化(P值均<0.05)。与sham组比较,PH术后1天,血清ALT、AST水平明显升高(P值均<0.05),随后分别于术后第6天和术后第2天恢复至sham组水平(P值均>0.05)。免疫组化染色结果显示,PH术后PCNA和Ki67阳性肝实质细胞数迅速增多,第2天数目最多,分别为86±5和89±5,随后逐渐减少;而PCNA和Ki67阳性非实质细胞数逐渐增多,第6天才达到高峰,分别为34±5和25±3,随后逐渐减少。PH术后总RGC32表达在第2天升到最高,随后逐渐降低,细胞质RGC32表达变化趋势与之一致;而细胞核RGC32的表达在PH术后第2天降到最低,随后逐渐升高。相关性分析显示,细胞核RGC32的表达与肝实质细胞的增殖呈负相关(R2=0.308 3,P=0.016 7),细胞质RGC32的表达与肝实质细胞的增殖呈正相关(R2=0.808 6,P<0.000 1)。细胞实验显示,与对照组相比,RGC32过表达EdU阳性率减少15.6%(P<0.01),敲低RGC32表达EdU阳性率增加19.2%(P<0.01)。  结论  肝实质细胞和非实质细胞增殖不同步,共同参与了肝脏再生。肝切除术后肝再生过程中,RGC32表达存在核质分布差异,核RGC32对肝细胞增殖具有抑制作用。

     

  • 图  1  小鼠PH术后肝再生过程中肝脏大小变化

    注: a,肝脏的典型代表图;b,肝体比。

    Figure  1.  Changes in liver size during PH postoperative liver regeneration in mice

    图  2  小鼠PH术后肝再生过程中肝脏结构和功能变化

    注: a,HE染色(×200);b,油红O染色(×100);c,油红O染色整体平均光密度;d,油红O染色CV区和PV区的平均光密度;e,血清ALT水平;f,血清AST水平。

    Figure  2.  Changes in liver structure and function during PH postoperative liver regeneration in mice

    图  3  小鼠PH术后肝再生过程中细胞增殖变化

    注: a,PCNA免疫组化染色(×400);b,PCNA+肝实质细胞增殖变化;c,PCNA+非实质细胞增殖变化;d,Ki67免疫组化染色(×400);e,Ki67+肝实质细胞增殖变化;f,Ki67+非实质细胞增殖变化。

    Figure  3.  Cell proliferation changes during PH postoperative liver regeneration in mice

    图  4  小鼠PH术后肝再生过程中RGC32的表达及分布变化

    注: a,qRT-PCR检测PH术后RGC32 mRNA的表达;b,总RGC32表达的平均光密度;c,细胞核RGC32表达的平均光密度;d,细胞质RGC32表达的平均光密度;e,RGC32免疫组化染色(×400)。

    Figure  4.  The expression and distribution of RGC32 during PH postoperative liver regeneration in mice

    图  5  RGC32的表达变化与肝实质细胞增殖变化的相关性分析

    Figure  5.  Correlation analysis between expression of RGC32 and proliferation of hepatocellular parenchymal cells

    图  6  RGC32核质分布对L02细胞增殖的影响

    注: a,正常肝组织RGC32/Ki67免疫荧光双染(×400);b,EdU染色(×400);c,Edu阳性率。

    Figure  6.  Effect of RGC32 cytoplasmic distribution on proliferation of L02 cells

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出版历程
  • 收稿日期:  2022-12-19
  • 出版日期:  2023-10-30
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