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锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞的影响及其机制

蔡浚哲 刘松柏 费晓斌 刘鹏 朱昌毫 王兴 潘耀振

引用本文:
Citation:

锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞的影响及其机制

DOI: 10.12449/JCH240519
基金项目: 

国家自然科学基金 (81960431);

国家自然科学基金 (81960535);

贵州省科技计划项目 (QKHZC[2021]YB444)

利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:蔡浚哲、刘松柏、费晓斌负责实验操作;刘鹏、朱昌毫负责资料收集与数据分析;王兴负责课题设计;潘耀振指导撰写论文并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    潘耀振, panyaozhen@gmc.edu.cn (ORCID: 0000-0002-9300-382X)

Effect of ankyrin-repeat domain-containing protein 22 on human hepatoma cells and its mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (81960431);

National Natural Science Foundation of China (81960535);

Science and Technology Fund of Guizhou Province (QKHZC[2021]YB444)

More Information
  • 摘要:   目的  探讨锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。  方法  通过TCGA数据库分析正常肝组织及肝细胞癌组织中ANKRD22的表达水平及其与预后的关系。通过qRT-PCR和Western Blot检测人正常肝细胞(L-02)和人肝癌细胞系(Huh7、Hep G2、MHCC-97H、SK-HEP-1、SMMC-7721)中ANKRD22的表达情况。通过CCK-8、EdU、划痕实验及Transwell检测ANKRD22对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。通过Western Blot检测ANKRD22与细胞周期蛋白、EMT相关蛋白之间的关系。通过KEGG、ssGSEA分析进一步探究ANKRD22在肝癌细胞中的作用机制,并进行实验验证。计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  TCGA数据库中ANKRD22在肝细胞癌组织中较正常肝组织高表达(t=5.083,P<0.05),且ANKRD22高表达患者的总生存期及疾病相关生存期均显著低于ANKRD22低表达的患者(P值均<0.05)。肝癌细胞系中ANKRD22的表达量均高于正常肝细胞(P值均<0.05)。增殖实验结果提示,ANKRD22过表达组的EdU阳性率、增殖速度均高于空载对照(Vector)组(t值分别为19.60、6.72,P值均<0.001);si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组的EdU阳性率、增殖速度较si-NC组均降低(P值均<0.001)。Cyclin E1、Cyclin D1、CDK7、CDK4在过表达组中表达高于Vector组(t值分别为3.54、4.95、6.34、5.19,P值均<0.01);在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组(P值均<0.001)。P27在过表达组中表达低于Vector组(t=6.12,P<0.001),在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均高于si-NC组(P值均<0.001)。侵袭、迁移实验结果提示,ANKRD22过表达组的迁移速度、穿膜数量(迁移组和侵袭组)均高于Vector组(t值分别为5.01、25.60、3.67,P值均<0.05);si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组的迁移速度、穿膜数量(迁移组和侵袭组)较si-NC组均降低(P值均<0.01)。N-cadherin、Vimentin、Snail在过表达组中表达高于Vector组(t值分别为12.13、8.85、13.97,P值均<0.001),在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组(P值均<0.001);E-cadherin在过表达组中表达低于Vector组(t=4.98,P<0.01),在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均高于si-NC组(P值均<0.001)。KEGG富集分析及ssGSEA分析提示,ANKRD22在肝细胞癌中与PI3K/AKT/mTOR信号通路相关,在过表达组中,p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR均较Vector组升高(t值分别为12.21、3.43、9.75,P值均<0.01);在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组(P值均<0.001)。  结论  ANKRD22在肝癌细胞中高表达,能促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并且能促进PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。

     

  • 图  1  ANKRD22在HCC中的表达情况

    注: a,ANKRD22在正常肝组织与HCC组织中的表达水平;b,ANKRD22不同表达水平患者的总生存期;c,ANKRD22不同表达水平患者的疾病相关生存期;d,ANKRD22在正常肝细胞与肝癌细胞系中的mRNA水平;e,ANKRD22在正常肝细胞与肝癌细胞系中的蛋白表达水平。

    Figure  1.  Expression of ANKRD22 in hepatocellular carcinoma

    图  2  ANKRD22转染后的表达情况

    注: a,ANKRD22在Vector组及过表达组MHCC-97H中的mRNA水平;b,ANKRD22在Vector组及过表达组MHCC-97H中的蛋白表达水平;c,ANKRD22在si-NC组及各敲低组Huh7中的mRNA水平;d,ANKRD22在si-NC组及各敲低组Huh7中的蛋白表达水平。

    Figure  2.  Expression of ANKRD22 after transfection

    图  3  ANKRD22对肝癌细胞增殖能力的影响

    注: a,EdU增殖试验结果;b,EdU阳性率统计结果;c,CCK-8试验统计结果;d,各分组中周期蛋白表达情况。

    Figure  3.  Effect of ANKRD22 on proliferation of hepatocellular carcinoma cells

    图  4  ANKRD22对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响

    注: a,划痕实验结果;b,划痕处迁移面积; c,Transwell实验结果;d,Transwell迁移细胞数;e,Transwell侵袭细胞数;f,各分组中EMT相关蛋白表达情况。

    Figure  4.  Effect of ANKRD22 on invasion and migration of hepatocellular carcinoma cells

    图  5  ANKRD22在肝癌细胞中的作用机制

    注: a,ANKRD22在HCC中的KEGG富集分析情况;b,ANKRD22在HCC中与PI3K/AKT/mTOR信号通路的ssGSEA富集分析情况;c,各分组中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。

    Figure  5.  Mechanism of ANKRD22 in hepatocellular carcinoma cells

  • [1] LLOVET JM, KELLEY RK, VILLANUEVA A, et al. Hepatocellular carcinoma[J]. Nat Rev Dis Primers, 2021, 7( 1): 6. DOI: 10.1038/s41572-020-00240-3.
    [2] FOGLIA B, TURATO C, CANNITO S. Hepatocellular carcinoma: Latest research in pathogenesis, detection and treatment[J]. Int J Mol Sci, 2023, 24( 15): 12224. DOI: 10.3390/ijms241512224.
    [3] DING CM, HOU JF, TAO GW, et al. Early diagnosis and screening of hepatocellular carcinoma[J/OL]. Chin J Hepatic Surg Electron Ed, 2023, 12( 1): 22- 28. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2023.01.005.

    丁成明, 侯嘉丰, 陶光伟, 等. 肝细胞癌早期诊断和筛查[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12( 1): 22- 28. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2023.01.005.
    [4] KIM E, VIATOUR P. Hepatocellular carcinoma: Old friends and new tricks[J]. Exp Mol Med, 2020, 52( 12): 1898- 1907. DOI: 10.1038/s12276-020-00527-1.
    [5] LIU XF, ZHANG J, YAO L, et al. Advances in targeted therapy combined with immunotherapy for advanced hepatocellular carcinoma[J]. J Clin Hepatol, 2022, 38( 5): 992- 997. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.05.004.

    刘秀峰, 张珏, 姚琳, 等. 中晚期肝细胞癌靶向联合免疫治疗进展[J]. 临床肝胆病杂志, 2022, 38( 5): 992- 997. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.05.004.
    [6] YANG SS. Evaluation of Clinical Significance of ANKRD22 in Colorectal Cancer[D]. Hangzhou: Zhejiang University, 2019. DOI: 10.27461/d.cnki.gzjdx.2019.001668.

    杨赛赛. ANKRD22在结直肠癌细胞中表达意义的研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2019. DOI: 10.27461/d.cnki.gzjdx.2019.001668
    [7] UTSUMI T, HOSOKAWA T, SHICHITA M, et al. ANKRD22 is an N-myristoylated hairpin-like monotopic membrane protein specifically localized to lipid droplets[J]. Sci Rep, 2021, 11( 1): 19233. DOI: 10.1038/s41598-021-98486-8.
    [8] WANG R, WU YH, ZHU Y, et al. ANKRD22 is a novel therapeutic target for gastric mucosal injury[J]. Biomed Pharmacother, 2022, 147: 112649. DOI: 10.1016/j.biopha.2022.112649.
    [9] ZHOU HN, LI YM. Conversion therapy for hepatocellular carcinoma[J/OL]. Chin J Hepatic Surg Electron Ed, 2022, 11( 6): 542- 547. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2022.06.002.

    周辉年, 李玉民. 肝癌转化治疗[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2022, 11( 6): 542- 547. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2022.06.002.
    [10] LU SL, YAO JN, YUAN GD, et al. Current status and prospect of clinical and basic research on conversion therapy for hepatocellular carcinoma[J]. Chin J Exp Surg, 2022, 39( 10): 1837- 1843. DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20220210-01043.

    陆世鎏, 姚建妮, 袁观斗, 等. 肝癌转化治疗临床与基础研究现状与展望[J]. 中华实验外科杂志, 2022, 39( 10): 1837- 1843. DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20220210-01043.
    [11] PARRA RG, ESPADA R, VERSTRAETE N, et al. Structural and energetic characterization of the ankyrin repeat protein family[J]. PLoS Comput Biol, 2015, 11( 12): e1004659. DOI: 10.1371/journal.pcbi.1004659.
    [12] LIU X, ZHAO JL, WU Q, et al. ANKRD22 promotes glioma proliferation, migration, invasion, and epithelial-mesenchymal transition by upregulating E2F1-mediated MELK expression[J]. J Neuropathol Exp Neurol, 2023, 82( 7): 631- 640. DOI: 10.1093/jnen/nlad034.
    [13] WU YG, LIU HX, GONG YF, et al. ANKRD22 enhances breast cancer cell malignancy by activating the Wnt/β-catenin pathway via modulating NuSAP1 expression[J]. Bosn J Basic Med Sci, 2021, 21( 3): 294- 304. DOI: 10.17305/bjbms.2020.4701.
    [14] YIN J, FU WF, DAI L, et al. ANKRD22 promotes progression of non-small cell lung cancer through transcriptional up-regulation of E2F1[J]. Sci Rep, 2017, 7( 1): 4430. DOI: 10.1038/s41598-017-04818-y.
    [15] WU YG, CHEN WX, ZHANG B, et al. ANKRD22 knockdown suppresses papillary thyroid cell carcinoma growth and migration and modulates the Wnt/β-catenin signaling pathway[J]. Tissue Cell, 2023, 84: 102193. DOI: 10.1016/j.tice.2023.102193.
    [16] PAN TH, LIU JW, XU S, et al. ANKRD22, a novel tumor microenvironment-induced mitochondrial protein promotes metabolic reprogramming of colorectal cancer cells[J]. Theranostics, 2020, 10( 2): 516- 536. DOI: 10.7150/thno.37472.
    [17] CHEN HH, YANG KQ, PANG LX, et al. ANKRD22 is a potential novel target for reversing the immunosuppressive effects of PMN-MDSCs in ovarian cancer[J]. J Immunother Cancer, 2023, 11( 2): e005527. DOI: 10.1136/jitc-2022-005527.
    [18] QIU YQ, YANG SS, PAN TH, et al. ANKRD22 is involved in the progression of prostate cancer[J]. Oncol Lett, 2019, 18( 4): 4106- 4113. DOI: 10.3892/ol.2019.10738.
    [19] TIAN LY, SMIT DJ, JÜCKER M. The role of PI3K/AKT/mTOR signaling in hepatocellular carcinoma metabolism[J]. Int J Mol Sci, 2023, 24( 3): 2652. DOI: 10.3390/ijms24032652.
    [20] LI YH, YIN YL, HE Y, et al. SOS1 regulates HCC cell epithelial-mesenchymal transition via the PI3K/AKT/mTOR pathway[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2022, 637: 161- 169. DOI: 10.1016/j.bbrc.2022.11.015.
    [21] CHEN JX, CHEN JD, HUANG JX, et al. HIF-2α upregulation mediated by hypoxia promotes NAFLD-HCC progression by activating lipid synthesis via the PI3K-AKT-mTOR pathway[J]. Aging(Albany NY), 2019, 11( 23): 10839- 10860. DOI: 10.18632/aging.102488.
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-10-13
  • 录用日期:  2023-11-17
  • 出版日期:  2024-05-25
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