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锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞的影响及其机制

蔡浚哲 刘松柏 费晓斌 刘鹏 朱昌毫 王兴 潘耀振

引用本文:
Citation:

锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞的影响及其机制

DOI: 10.12449/JCH240519
基金项目: 

国家自然科学基金 (81960431);

国家自然科学基金 (81960535);

贵州省科技计划项目 (QKHZC[2021]YB444)

利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:蔡浚哲、刘松柏、费晓斌负责实验操作;刘鹏、朱昌毫负责资料收集与数据分析;王兴负责课题设计;潘耀振指导撰写论文并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    潘耀振, panyaozhen@gmc.edu.cn (ORCID: 0000-0002-9300-382X)

Effect of ankyrin-repeat domain-containing protein 22 on human hepatoma cells and its mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (81960431);

National Natural Science Foundation of China (81960535);

Science and Technology Fund of Guizhou Province (QKHZC[2021]YB444)

More Information
  • 摘要:   目的  探讨锚蛋白重复序列22(ANKRD22)对人肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。  方法  通过TCGA数据库分析正常肝组织及肝细胞癌组织中ANKRD22的表达水平及其与预后的关系。通过qRT-PCR和Western Blot检测人正常肝细胞(L-02)和人肝癌细胞系(Huh7、Hep G2、MHCC-97H、SK-HEP-1、SMMC-7721)中ANKRD22的表达情况。通过CCK-8、EdU、划痕实验及Transwell检测ANKRD22对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。通过Western Blot检测ANKRD22与细胞周期蛋白、EMT相关蛋白之间的关系。通过KEGG、ssGSEA分析进一步探究ANKRD22在肝癌细胞中的作用机制,并进行实验验证。计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  TCGA数据库中ANKRD22在肝细胞癌组织中较正常肝组织高表达(t=5.083,P<0.05),且ANKRD22高表达患者的总生存期及疾病相关生存期均显著低于ANKRD22低表达的患者(P值均<0.05)。肝癌细胞系中ANKRD22的表达量均高于正常肝细胞(P值均<0.05)。增殖实验结果提示,ANKRD22过表达组的EdU阳性率、增殖速度均高于空载对照(Vector)组(t值分别为19.60、6.72,P值均<0.001);si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组的EdU阳性率、增殖速度较si-NC组均降低(P值均<0.001)。Cyclin E1、Cyclin D1、CDK7、CDK4在过表达组中表达高于Vector组(t值分别为3.54、4.95、6.34、5.19,P值均<0.01);在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组(P值均<0.001)。P27在过表达组中表达低于Vector组(t=6.12,P<0.001),在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均高于si-NC组(P值均<0.001)。侵袭、迁移实验结果提示,ANKRD22过表达组的迁移速度、穿膜数量(迁移组和侵袭组)均高于Vector组(t值分别为5.01、25.60、3.67,P值均<0.05);si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组的迁移速度、穿膜数量(迁移组和侵袭组)较si-NC组均降低(P值均<0.01)。N-cadherin、Vimentin、Snail在过表达组中表达高于Vector组(t值分别为12.13、8.85、13.97,P值均<0.001),在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组(P值均<0.001);E-cadherin在过表达组中表达低于Vector组(t=4.98,P<0.01),在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均高于si-NC组(P值均<0.001)。KEGG富集分析及ssGSEA分析提示,ANKRD22在肝细胞癌中与PI3K/AKT/mTOR信号通路相关,在过表达组中,p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR均较Vector组升高(t值分别为12.21、3.43、9.75,P值均<0.01);在si-ANKRD22#2组及si-ANKRD22#3组中表达均低于si-NC组(P值均<0.001)。  结论  ANKRD22在肝癌细胞中高表达,能促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并且能促进PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。

     

  • 图  1  ANKRD22在HCC中的表达情况

    注: a,ANKRD22在正常肝组织与HCC组织中的表达水平;b,ANKRD22不同表达水平患者的总生存期;c,ANKRD22不同表达水平患者的疾病相关生存期;d,ANKRD22在正常肝细胞与肝癌细胞系中的mRNA水平;e,ANKRD22在正常肝细胞与肝癌细胞系中的蛋白表达水平。

    Figure  1.  Expression of ANKRD22 in hepatocellular carcinoma

    图  2  ANKRD22转染后的表达情况

    注: a,ANKRD22在Vector组及过表达组MHCC-97H中的mRNA水平;b,ANKRD22在Vector组及过表达组MHCC-97H中的蛋白表达水平;c,ANKRD22在si-NC组及各敲低组Huh7中的mRNA水平;d,ANKRD22在si-NC组及各敲低组Huh7中的蛋白表达水平。

    Figure  2.  Expression of ANKRD22 after transfection

    图  3  ANKRD22对肝癌细胞增殖能力的影响

    注: a,EdU增殖试验结果;b,EdU阳性率统计结果;c,CCK-8试验统计结果;d,各分组中周期蛋白表达情况。

    Figure  3.  Effect of ANKRD22 on proliferation of hepatocellular carcinoma cells

    图  4  ANKRD22对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响

    注: a,划痕实验结果;b,划痕处迁移面积; c,Transwell实验结果;d,Transwell迁移细胞数;e,Transwell侵袭细胞数;f,各分组中EMT相关蛋白表达情况。

    Figure  4.  Effect of ANKRD22 on invasion and migration of hepatocellular carcinoma cells

    图  5  ANKRD22在肝癌细胞中的作用机制

    注: a,ANKRD22在HCC中的KEGG富集分析情况;b,ANKRD22在HCC中与PI3K/AKT/mTOR信号通路的ssGSEA富集分析情况;c,各分组中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。

    Figure  5.  Mechanism of ANKRD22 in hepatocellular carcinoma cells

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出版历程
  • 收稿日期:  2023-10-13
  • 录用日期:  2023-11-17
  • 出版日期:  2024-05-25
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