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白细胞介素33在肝细胞癌患者中的表达及其对CD8+T淋巴细胞功能的调节作用

王海鹏 刘屹 李东辉 沈光辉

引用本文:
Citation:

白细胞介素33在肝细胞癌患者中的表达及其对CD8+T淋巴细胞功能的调节作用

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.01.018
基金项目: 

西安市科技计划项目 (2019114613YX011S f 035(3));

西安交通大学基本业务项目 (XZY012019112);

国家自然科学基金 (81402012)

利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:王海鹏、李东辉参与研究数据的分析解释,并起草文章;刘屹参与实验设计及修改文章关键内容;沈光辉对研究的思路或设计有关键贡献,并参与修改文章。
详细信息
    通信作者:

    沈光辉,guangxian1982@126.com

Expression of interleukin-33 in hepatocellular carcinoma patients and its role in regulating CD8+ T cell function

Research funding: 

Scientific Plan Program of Xi’an (2019114613YX011S f 035(3));

Basic Program of Xi’an Jiaotong University (XZY012019112);

National Natural Science Foundation of China (81402012)

  • 摘要:   目的  观察肝细胞癌(HCC)患者外周血白细胞介素33(IL-33)的变化,探讨IL-33对HCC患者CD8+T淋巴细胞的调节作用和可能机制。  方法  选择2019年4月—2020年1月陕西省人民医院收治的44例HCC患者和20例健康对照者为研究对象。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附试验检测血浆IL-33及其受体肿瘤抑制素2(ST2)的水平,实时定量PCR法检测PBMC中IL-33和ST2 mRNA相对表达量。纯化CD8+T淋巴细胞,使用重组IL-33刺激培养,CCK-8法检测细胞增殖,酶联斑点吸附试验检测穿孔素和颗粒酶B分泌,流式细胞术检测程序性死亡受体-1(PD-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)表达,比较IL-33刺激前后细胞增殖、毒性分子分泌、免疫检查点分子的变化。CD8+T淋巴细胞与HepG2细胞共培养,通过检测乳酸脱氢酶表达计算CD8+T淋巴细胞诱导HepG2细胞死亡比例,比较IL-33刺激前后CD8+T淋巴细胞杀伤功能的变化。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验,相关性分析采用Pearson分析法。  结果  HCC组血浆IL-33水平低于对照组[(269.80±63.08) pg/mL vs (339.50±64.43) pg/mL,t=4.072,P<0.001],HCC组PBMC中IL-33 mRNA相对表达量低于对照组(1.07±0.14 vs 2.45±0.87,t=10.250,P<0.001)。血浆ST2水平和PBMC中ST2 mRNA相对表达量在HCC组和对照组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD8+T淋巴细胞比例与血浆IL-33、ST2水平均无明显相关性(P值均>0.05)。HCC组CD8+T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B的水平均低于对照组(P值均<0.05),而HCC组CD8+T淋巴细胞中PD-1、LAG-3、CTLA-4阳性细胞比例均高于对照组(P值均<0.05)。重组IL-33刺激对两组CD8+T淋巴细胞增殖和免疫检查点分子表达均无显著影响(P值均>0.05),但可促进穿孔素、颗粒酶B的分泌(P值均<0.05)。HCC组CD8+T淋巴细胞杀伤活性较对照组降低(P<0.05),重组IL-33刺激可提升CD8+T淋巴细胞杀伤功能,主要表现为诱导HepG2细胞死亡比例升高(P<0.05),IFNγ和TNFα分泌水平增加(P值均<0.05)。  结论  HCC患者血浆IL-33水平降低。IL-33可通过促进穿孔素和颗粒酶B的分泌增强HCC患者CD8+T淋巴细胞杀伤活性,为HCC治疗提供新的靶点。

     

  • 图  1  CD3+CD8+T淋巴细胞典型流式分析图

    注:a, HCC组; b,对照组。

    图  2  CD3+CD8+T淋巴细胞与IL-33、ST2水平相关性分析

    图  3  两组CD8+T淋巴细胞无IL-33刺激和经IL-33刺激后PD-1、LAG-3和CTLA-4表达的典型流式分析图

    表  1  两组一般资料比较

    指标 HCC组
    (n=44)
    对照组
    (n=20)
    统计值 P
    男/女(例) 28/16 13/7 χ2=0.644 0.497
    年龄(岁) 49.5±13.4 46.2±11.8 t=0.946 0.348
    AFP(ng/mL) 778.1±129.8 5.9±0.7 t=26.489 <0.001
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    表  2  两组IL-33和ST2水平比较

    指标 HCC组(n=44) 对照组(n=20) t P
    CD3+CD8+T淋巴细胞(%) 27.82±6.97 26.80±10.31 0.468 0.641
    血浆IL-33(pg/mL) 269.80±63.08 339.50±64.43 4.072 <0.001
    IL-33 mRNA 1.07±0.14 2.45±0.87 10.250 <0.001
    血浆ST2(pg/mL) 82.58±10.92 83.50±4.94 0.359 0.721
    ST2 mRNA 1.09±0.14 1.07±0.10 0.432 0.667
    下载: 导出CSV

    表  3  两组无IL-33刺激和经IL-33刺激后CD8+T淋巴细胞增殖、毒性分子分泌和免疫检查点分子表达的比较

    指标 HCC组(n=28) 对照组(n=11)
    无IL-33刺激 经IL-33刺激 t P 无IL-33刺激 经IL-33刺激 t P
    细胞增殖(×105个) 1.24±0.08 1.29±0.19 1.077 0.286 1.20±0.13 1.25±0.24 0.581 0.568
    穿孔素(×105个) 64.21±9.831) 111.60±36.902) 6.563 <0.001 74.55±8.45 160.90±49.25 5.733 <0.001
    颗粒酶B(×105个) 38.82±14.051) 51.32±19.252) 2.775 0.008 92.92±29.44 130.40±46.97 2.436 0.023
    PD-1+(%) 7.55±3.531) 7.63±2.922) 0.095 0.925 1.98±0.16 2.17±0.35 1.646 0.116
    LAG-3+(%) 3.30±1.011) 3.63±1.072) 1.207 0.233 2.51±0.64 2.82±0.65 1.140 0.268
    CTLA-4+(%) 7.85±1.001) 7.86±0.732) 0.014 0.989 4.15±1.13 4.86±0.97 1.600 0.125
    注:与对照组无IL-33刺激比较,1) P<0.05;与对照组经IL-33刺激比较,2)P<0.05。
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    表  4  无IL-33刺激和经IL-33刺激后CD8+T淋巴细胞杀伤功能比较

    指标 HCC组(n=11) 对照组(n=6)
    无IL-33刺激 经IL-33刺激 t P 无IL-33刺激 经IL-33刺激 t P
    细胞死亡比例(%) 14.90±4.27 20.86±3.73 3.482 0.002 21.97±5.72 30.30±4.24 2.866 0.017
    IFNγ (pg/mL) 29.27±6.081) 38.36±9.752) 2.624 0.016 38.33±10.09 56.00±7.18 3.493 0.006
    TNFα (pg/mL) 807.8±130.51) 1276±368.22) 3.978 <0.001 1147±264.0 2200±706.2 3.421 0.007
    注:与对照组无IL-33刺激比较,1) P<0.05;与对照组经IL-33刺激比较,2)P<0.05。
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-06-19
  • 录用日期:  2021-07-29
  • 出版日期:  2022-01-20
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