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6-姜酮酚抑制肝内胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭作用及其机制探讨

陈泽昊 朱文杰 申兵兵 江建新

引用本文:
Citation:

6-姜酮酚抑制肝内胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭作用及其机制探讨

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.04.022
基金项目: 

国家自然科学基金 (81871965)

利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:陈泽昊对于研究的思路或设计有关键贡献;陈泽昊、朱文杰参与了研究数据的获取及分析解释;陈泽昊、申兵兵参与起草或修改文章关键内容;江建新参与文章的审阅及批改。
详细信息
    通信作者:

    江建新, rm002979@whu.edu.cn

Inhibitory effect of 6-paradol on the proliferation, migration, and invasion of intrahepatic cholangiocarcinoma cells and its mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (81871965)

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  • 摘要:   目的  研究6-姜酮酚(6-Paradol)对人肝内胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。  方法  人肝内胆管癌细胞系HCCC 9810和HUCCT1以不同浓度的6-Paradol及等体积的DMSO(对照组)处理后,采用CCK-8、平板克隆、划痕愈合及Transwell实验检测其增殖、迁移及侵袭能力。应用生物信息学软件Swiss Target Prediction预测6-Paradol作用的蛋白靶点,采用Western blot检测胆管癌细胞中STAT3、p-STAT3、SRC、p-mTOR、p21、Bcl-2以及p53的蛋白表达水平;采用药物亲和反应实验(DARTS)探究6-Paradol与STAT3的相互作用;胆管癌HCCC 9810和HUCCT1细胞分别转染STAT3过表达质粒或sh-p21质粒后,qRT-PCR检测各组细胞中STAT3和p21的mRNA水平,Western blot检测STAT3和p21的蛋白表达量;CCK-8、划痕愈合及Transwell实验检测各组细胞增殖及迁移侵袭能力。计量资料两组间比较采用t检验;多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  与对照组相比,6-Paradol处理组中各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显减弱(P值均<0.05)。6-Paradol处理组细胞中STAT3、p-STAT3的表达水平较对照组显著下调(P值均<0.05),p21的表达水平显著增加(P值均<0.05),而Bcl-2、SRC和p-mTOR的表达水平无明显变化(P值均>0.05)。6-Paradol处理组中STAT3被蛋白酶水解的比例分别减少了48.66%、45.33%(t值分别为16.64、8.76, P值均<0.05);分别转染STAT3过表达质粒及沉默p21质粒后,胆管癌细胞中STAT3 mRNA水平均显著增加(tHCCC 9810=2.82,tHUCCT1=5.60,P值均<0.05),p21 mRNA水平均显著降低(tHCCC 9810=6.84,tHUCCT1=3.91, P值均<0.05)。CCK-8结果提示6-Paradol作用48 h及72 h后HCCC 9810细胞和HUCCT1细胞中STAT3过表达组的增殖率较单独给药组显著提高,p21沉默组增殖率较单独给药组也明显提高(P值均<0.05)。划痕愈合实验结果提示在过表达STAT3或沉默p21的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比划痕愈合率明显提升(P值均<0.05)。Transwell实验结果表明,在过表达STAT3或者沉默p21表达的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比迁移率均明显提升(P值均<0.05);在过表达STAT3或沉默p21表达的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比侵袭率均显著提升(P值均<0.05)。  结论  6-Paradol通过靶向作用于STAT3-p21通路抑制胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

     

  • 图  1  CCK-8及克隆形成实验检测不同浓度的6-Paradol对人HCCC 9810和HUCCT1细胞增殖的抑制作用

    注:a、b,CCK-8实验;c,平板克隆实验。*P<0.05, * *P<0.01, * * *P<0.001。

    Figure  1.  The inhibitory effect of different concentrations of 6-Paradol on the proliferation of HCCC 9810 and HUCCT1 cells detected by CCK-8 and colony formation assays

    图  2  不同浓度6-Paradol对人HCCC 9810和HUCCT1细胞迁移、侵袭能力的影响

    注:a、c,划痕愈合实验;b、d,Transwell小室实验(×100)。

    Figure  2.  Effect of different concentrations of 6-Paradol on the migration and invasion ability of HCCC 9810 and HUCCT1 cells

    图  3  6-Paradol的结构及其作用的蛋白靶点预测及互作网络构建

    注:a,6-Paradol的结构;b,6-Paradol作用的蛋白靶点预测及互作网络构建。

    Figure  3.  6-Paradol's structure and protein target prediction and interaction network construction

    图  4  Western blot检测不同浓度的6-Paradol对人HCCC 9810和HUCCT1细胞中相关蛋白表达的影响

    注:a, 6-Paradol处理后HCCC 9810细胞中STAT3、p-mTOR蛋白表达量;b, 6-Paradol处理后HUCCT1细胞中STAT3、p-mTOR蛋白表达量;c, 6-Paradol处理后HCCC 9810细胞中p-STAT3、SRC蛋白表达量;d, 6-Paradol处理后HUCCT1细胞中p-STAT3、SRC蛋白表达量;e, 6-Paradol处理后HCCC 9810细胞中p21、Bcl-2、p53蛋白表达量;f, 6-Paradol处理后HUCCT1细胞中p21、Bcl-2、p53蛋白表达量。

    Figure  4.  Western blot was used to detect the effect of different concentrations of 6-Paradol on the expression of related proteins in HCCC 9810 and HUCCT1 cells

    图  5  DARTS探究6-Paradol与STAT3的相互作用

    注:a、b、c, DARTS探究HCCC 9810细胞中6-Paradol与STAT3的相互作用;d、e、f,DARTS探究HUCCT1细胞中6-Paradol与STAT3的相互作用。* * *P<0.001。

    Figure  5.  DARTS was used to explore the interaction between 6-Paradol and STAT3

    图  6  qRT-PCR验证STAT3过表达质粒及sh-p21质粒的转染效率

    注:*P<0.05, * *P<0.01。

    Figure  6.  qRT-PCR was used to verify the transfection efficiency of STAT3 overexpression plasmid and sh-p21 plasmid

    图  7  6-Paradol对HCCC 9810和HUCCT1细胞增殖及迁移、侵袭的抑制作用

    注:a、b,CCK-8实验检验细胞增殖能力;c、d,划痕实验;e、f,Transwell小室实验(×100);* * *P<0.001。

    Figure  7.  Inhibitory effect of 6-Paradol on the proliferation, migration and invasion of HCCC 9810 and HUCCT1 cells

  • [1] RAZUMILAVA N, GORES GJ. Cholangiocarcinoma[J]. Lancet, 2014, 383(9935): 2168-2179. DOI: 10.1016/s0140-6736(13)61903-0.
    [2] MOEINI A, SIA D, BARDEESY N, et al. Molecular pathogenesis and targeted therapies for intrahepatic cholangiocarcinoma[J]. Clin Cancer Res, 2016, 22(2): 291-300. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-14-3296.
    [3] ANDERSEN JB. Molecular pathogenesis of intrahepatic cholangiocarcinoma[J]. J Hepatobiliary Pancreat Sci, 2015, 22(2): 101-113. DOI: 10.1002/jhbp.155.
    [4] KIM HJ, KIM IS, REHMAN SU, et al. Effects of 6-paradol, an unsaturated ketone from gingers, on cytochrome P450-mediated drug metabolism[J]. Bioorg Med Chem Lett, 2017, 27(8): 1826-1830. DOI: 10.1016/j.bmcl.2017.02.047.
    [5] SURH YJ, PARK KK, CHUN KS, et al. Anti-tumor-promoting activities of selected pungent phenolic substances present in ginger[J]. J Environ Pathol Toxicol Oncol, 1999, 18(2): 131-139.
    [6] MARIADOSS AV, KATHIRESAN S, MUTHUSAMY R, et al. Protective effects of[6]-paradol on histological lesions and immunohistochemical gene expression in DMBA induced hamster buccal pouch carcinogenesis[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2013, 14(5): 3123-3129. DOI: 10.7314/apjcp.2013.14.5.3123.
    [7] HUYNH J, CHAND A, GOUGH D, et al. Therapeutically exploiting STAT3 activity in cancer - using tissue repair as a road map[J]. Nat Rev Cancer, 2019, 19(2): 82-96. DOI: 10.1038/s41568-018-0090-8.
    [8] HARPER JW, ADAMI GR, WEI N, et al. The p21 Cdk-interacting protein Cip1 is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases[J]. Cell, 1993, 75(4): 805-816. DOI: 10.1016/0092-8674(93)90499-g.
    [9] LECHNER JF, STONER GD. Gingers and their purified components as cancer chemopreventative agents[J]. Molecules, 2019, 24(16): 2859. DOI: 10.3390/molecules24162859.
    [10] LI Q, WANG R, WANG LP, et al. Paradol inhibits proliferation and migration of human hepatocellular carcinoma cells[J]. Sci Adv Mater, 2019, 11(10): 1467-1473. DOI: 10.1166/sam.2019.3555.
    [11] YU H, JOVE R. The STATs of cancer-new molecular targets come of age[J]. Nat Rev Cancer, 2004, 4(2): 97-105. DOI: 10.1038/nrc1275.
    [12] HE G, KARIN M. NF-κB and STAT3 - key players in liver inflammation and cancer[J]. Cell Res, 2011, 21(1): 159-168. DOI: 10.1038/cr.2010.183.
    [13] FUKUDA A, WANG SC, MORRIS JPT, et al. Stat3 and MMP7 contribute to pancreatic ductal adenocarcinoma initiation and progression[J]. Cancer Cell, 2011, 19(4): 441-455. DOI: 10.1016/j.ccr.2011.03.002.
    [14] SAINI U, NAIDU S, ELNAGGAR AC, et al. Elevated STAT3 expression in ovarian cancer ascites promotes invasion and metastasis: A potential therapeutic target[J]. Oncogene, 2017, 36(2): 168-181. DOI: 10.1038/onc.2016.197.
    [15] GARTEL AL, RADHAKRISHNAN SK. Lost in transcription: p21 repression, mechanisms, and consequences[J]. Cancer Res, 2005, 65(10): 3980-3985. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-04-3995.
    [16] SHAMLOO B, USLUER S. p21 in cancer research[J]. Cancers (Basel), 2019, 11(8): 1178. DOI: 10.3390/cancers11081178.
    [17] GEORGAKILAS AG, MARTIN OA, BONNER WM. p21: A two- faced genome guardian[J]. Trends Mol Med, 2017, 23(4): 310-319. DOI: 10.1016/j.molmed.2017.02.001.
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  • 收稿日期:  2021-08-24
  • 出版日期:  2022-04-20
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