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益脾养肝方对大鼠肝癌前病变肝干细胞恶性转化的影响和作用机制

鞠迪 李汨 韩曼 房冰莹 闫曙光 李京涛

引用本文:
Citation:

益脾养肝方对大鼠肝癌前病变肝干细胞恶性转化的影响和作用机制

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.04.023
基金项目: 

国家自然科学基金 (81904192)

陕西省教育厅 (19JK0244)

陕西中医药大学科学研究计划项目 (2017QN15)

陕西中医药大学学科创新团队项目 (2019-YS06)

陕西省自然科学基础研究计划青年项目 (2022JQ-793)

伦理学声明:本研究方案于2019年3月13日经由陕西中医药大学伦理委员会审批,批号:SUCMDL20211115001,符合实验室动物管理与使用准则。
利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:鞠迪负责课题设计,资料分析,撰写论文;李汨、韩曼负责收集数据,修改论文;房冰莹负责整理数据,统计分析;李京涛、闫曙光负责拟定写作思路,指导撰写文章并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    李京涛,Lijingtao555@163.com

Effect of Yipi Yanggan prescription on malignant transformation of liver stem cells in rats with liver precancerous lesion and its mechanism of action

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (81904192);

Education Department of Shaanxi Provincial Government (19JK0244);

Scientific Research Projects of Shaanxi University of Chinese Medicine (2017QN15);

Subject Innovation Team of Shaanxi University of Chinese Medicine (2019-YS06);

Natural Science Foundation for Young Scholars of Shaanxi Province (2022JQ-793)

More Information
  • 摘要:   目的  探讨益脾养肝方对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌前病变中肝干细胞恶性转化的影响及可能的分子机制。  方法  将35只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(空白组)、DEN模型组(模型组)、DEN+益脾养肝方组(益脾养肝方组)和DEN+护肝片组(护肝片组),空白组5只,其余3组各10只。腹腔注射DEN诱导肝癌前病变模型,给药16周后处死。检测血清ALT、AST、Alb水平;取肝组织观察并记录其大小、外观等变化,计算肝重比(肝脏指数);HE染色、天狼星红染色观察大鼠肝组织病理形态学改变;免疫组化检测OV6和谷胱甘肽S转移酶(GST-Pi)的表达;实时定量PCR检测EpCAM、CD133和CD90 mRNA的表达;Western Blot检测PI3K、Akt、mTOR蛋白及其磷酸化水平的表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  与模型组相比,益脾养肝方组和护肝片组肝脏病理形态显著改善,肝脏指数、ALT和AST水平降低、Alb水平升高(P值均<0.05);同时GST-Pi、OV6、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白和EpCAM、CD133、CD90 mRNA表达均明显降低(P值均<0.05)。与护肝片组相比,益脾养肝方组对肝脏的保护作用更显著,其肝脏指数、ALT和AST水平显著降低、Alb水平显著升高(P值均<0.05);且GST-Pi、OV6、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白和EpCAM、CD133、CD90 mRNA表达水平均显著降低(P值均<0.05)。  结论  益脾养肝方可通过抑制肝干细胞恶性转化改善DEN诱导的大鼠肝癌前病变,其作用机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

     

  • 图  1  肝组织HE染色和天狼星红染色(×100)

    Figure  1.  Images of liver sections stained by Hematoxylin-Eosin (HE) and Sirius Red staining(×100)

    图  2  GST-Pi及OV6在DEN诱导肝癌前病变组织中的表达

    注:GST-Pi免疫组化染色(×200),OV6免疫组化染色(×400)。

    Figure  2.  Immunohistochemistry staining of GST-Pi and OV6 in DEN-induced liver precancerous lesion

    图  3  PI3K/Akt/mTOR在DEN诱导肝癌前病变组织中的表达

    Figure  3.  Expression of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway- related protein in DEN-induced liver precancerous lesion

    表  1  引物序列表

    Table  1.   Primer sequences used in RT-PCR

    基因 上游 下游
    CD90 ATCCAGCATGAGTTCAGCCT ATCCTTGGTGGTGAAGTTGG
    CD133 AACCACAACGGAAGTCAGCT TGACATCCCCAGTTTGGTTT
    EpCAM CGCAGCTCAGAAAGACTGTG CTCGGGATCATACAGACCGT
    β-actin CAACCTTCTTGCAGCTCCTC TTCTGACCCATACCCACCAT
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    表  2  各组大鼠肝组织中胶原沉积半定量分析

    Table  2.   Semi-quantitative analysis of collagen deposition in liver tissues of rats in various groups

    组别 动物数(只) 胶原沉积光密度值(107)
    空白组 5 1.49±0.45
    模型组 9 12.54±5.361)
    护肝片组 9 4.59±1.042)
    益脾养肝方组 10 2.32±0.512)3)
    F 20.29
    P <0.05
    注:与空白组相比,1)P<0.05;与模型组相比,2)P<0.05;与护肝片组相比,3)P<0.05。
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    表  3  各组大鼠血清ALT、AST、Alb和肝脏指数比较

    Table  3.   Comparison of ALT, AST, Alb and liver index in various groups

    组别 动物数(只) ALT(U/L) AST(U/L) Alb(g/L) 肝脏指数(%)
    空白组 5 26.67±4.60 82.48±14.54 36.68±2.43 2.78±0.18
    模型组 9 46.67±6.521) 228.89±16.881) 20.46±2.791) 5.79±0.621)
    护肝片组 9 38.15±1.362) 196.91±17.972) 24.98±1.312) 4.65±0.392)
    益脾养肝方组 10 29.97±3.832)3) 157.17±21.522)3) 27.81±1.472)3) 3.44±0.722)3)
    F 16.28 49.15 38.90 22.32
    P <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
    注:与空白组相比,1)P<0.01;与模型组相比,2)P<0.05;与护肝片组相比,3)P<0.05。
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    表  4  各组大鼠肝组织中OV6及GST-Pi含量半定量分析

    Table  4.   Semi-quantitative analysis of OV6 and GST-Pi in liver tissues of rats in various groups

    组别 动物数(只) OV6光密度值(×107) GST-Pi光密度值(×108)
    空白组 5 0.57±0.19 1.27±0.78
    模型组 9 10.71±3.811) 6.71±1.321)
    护肝片组 9 5.17±1.412) 4.11±1.272)
    益脾养肝方组 10 2.21±0.922)3) 1.79±0.882)3)
    F 38.21 33.81
    P <0.05 <0.05
    注:与空白组相比,1)P<0.05;与模型组相比,2)P<0.05;与护肝片组相比,3)P<0.05。
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    表  5  各组大鼠肝组织中EpCAM、CD133和CD90 mRNA相对表达量比较

    Table  5.   Comparison of mRNA expression levels of EpCAM, CD133 and CD90 in various groups

    组别 动物数(只) EpCAM CD133 CD90
    空白组 5 1.24±0.32 1.18±0.15 1.07±0.26
    模型组 9 18.59±2.731) 20.66±3.841) 21.00±3.511)
    护肝片组 9 10.37±2.362) 9.17±1.902) 12.04±1.612)
    益脾养肝方组 10 6.13±1.602)3) 5.26±1.302)3) 9.11±2.142)3)
    F 129.40 110.20 70.61
    P <0.05 <0.05 <0.05
    注:与空白组相比,1)P<0.05;与模型组相比,2)P<0.05;与护肝片组相比,3)P<0.05。
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    表  6  各组大鼠肝组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白半定量分析

    Table  6.   Semi-quantitative analysis of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway-related protein in liver tissues of rats in various groups

    组别 动物数(只) p-mTOR mTOR p-PI3K PI3K p-Akt Akt
    空白组 5 1 1 1 1 1 1
    模型组 9 4.9±0.411) 1.08±0.16 10.05±0.981) 1.06±0.22 5.72±1.461) 1.31±0.07
    护肝片组 10 2.64±0.282) 1.07±0.19 5.74±0.712) 1.12±0.32 2.54±0.212) 1.34±0.16
    益脾养肝方组 9 2.08±0.142)3) 0.89±0.23 3.40±0.752)3) 0.93±0.32 1.86±0.192)3) 1.02±0.31
    F 40.35 0.27 58.61 0.22 15.38 1.19
    P <0.05 >0.05 <0.05 >0.05 <0.05 >0.05
    注:与空白组相比,1)P<0.05;与模型组相比,2)P<0.05;与护肝片组相比,3)P<0.05。
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  • 收稿日期:  2021-11-18
  • 出版日期:  2022-04-20
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