从外周血中分离单核细胞(PBMC)并培养成DC,从细胞形态和表面标志进行鉴定。通过RT-PCR扩增胰腺癌MiaPaCa-2细胞的MUC1 mRNA后用电穿孔法将其转染DC。采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测培养不同时间点DC的MUC1的表达。用四甲基偶氮唑蓝法检测DC存活率。采用51Cr标准细胞毒实验观察转染MUC1 mRNA的DC诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应;应用ELASA法检测CTL的IFN-γ释放量。
培养获得的细胞呈现典型的DC形态特征和表面标志(CD40+、HLA-DR+、CD83+、CD86+)。MUC1 mRNA转染DC48h后,细胞MUC1 mRNA表达水平最高,为38.43(36.89~48.06),蛋白表达亦最强。转染后DC的存活率稳定在80%左右。转染MUC1 mRNA的DC可有效诱导HLA-A2 +/MUC+特异性CTL免疫反应;胰腺癌Capan-2细胞与转染MUC1的DC刺激MUC1特异性CTL的24 h IFN-γ释放量分别为(28.44±4.96)和(16.31 ±2.54) U/ml,差异具有统计学意义。










