目的：构建HBV rtA181T/sW172突变株并在体外研究它的生物学特性。
方法：我们首先以含有1.3拷贝HBV基因组的pHBV4.1（野生型HBV）质粒作为模板，通过PCR定点突变技术构建HBV rtA181T/sW172突变株。然后通过高压尾静脉注射分别将突变株（rtA181T/sW172）和野生株（pHBV4.1）质粒感染小鼠，从而构建了HBV复制小鼠模型。分别在注射后的第1、3、5、7、10、12天杀死小鼠并获得肝脏组织和血清标本。用ELISA方法检测血清中的HBsAg和HBeAg含量，用qPCR检测血清中的HBV DNA和肝脏组织的HBV RNA，并用Southern杂交印记法检测肝脏中的HBV DNA复制中间体。
结果：HBV rtA181T/sW172突变株可以感染小鼠并且能够在小鼠体内进行基因转录、复制、分泌。在突变株感染小鼠组中的血清中一直未能检测到HBsAg，而在野生株感染的小鼠中，仅在第1、3、5天检测到HBsAg。然而两组血清HBeAg含量相似。与野生株感染小鼠相比，突变株感染小鼠组肝脏组织的HBcAg表达量明显升高。进一步研究表明，突变株感染小鼠在第1天就能检测到大量HBV RNA转录体，第3天达高峰，从第5天到第15天逐渐下降。野生株感染小鼠体内的转录水平在第5天开始明显下降，第15天检测不到，总是低于突变株感染小鼠组。两组小鼠肝脏组织中的HBV DNA复制中间体水平相似，但血清HBV DNA水平突变株感染组较低。
结论：我们成功构建了rtA181T/sW172突变株的小鼠复制模型。我们的研究表明，这个突变株能够损害血清HBsAg的分泌、降低血清HBV DNA水平，但它在肝脏组织中的转录和复制能力得到增强。本研究为973资助项目（No.2007CB512902）。
方法：我们首先以含有1.3拷贝HBV基因组的pHBV4.1（野生型HBV）质粒作为模板，通过PCR定点突变技术构建HBV rtA181T/sW172突变株。然后通过高压尾静脉注射分别将突变株（rtA181T/sW172）和野生株（pHBV4.1）质粒感染小鼠，从而构建了HBV复制小鼠模型。分别在注射后的第1、3、5、7、10、12天杀死小鼠并获得肝脏组织和血清标本。用ELISA方法检测血清中的HBsAg和HBeAg含量，用qPCR检测血清中的HBV DNA和肝脏组织的HBV RNA，并用Southern杂交印记法检测肝脏中的HBV DNA复制中间体。
结果：HBV rtA181T/sW172突变株可以感染小鼠并且能够在小鼠体内进行基因转录、复制、分泌。在突变株感染小鼠组中的血清中一直未能检测到HBsAg，而在野生株感染的小鼠中，仅在第1、3、5天检测到HBsAg。然而两组血清HBeAg含量相似。与野生株感染小鼠相比，突变株感染小鼠组肝脏组织的HBcAg表达量明显升高。进一步研究表明，突变株感染小鼠在第1天就能检测到大量HBV RNA转录体，第3天达高峰，从第5天到第15天逐渐下降。野生株感染小鼠体内的转录水平在第5天开始明显下降，第15天检测不到，总是低于突变株感染小鼠组。两组小鼠肝脏组织中的HBV DNA复制中间体水平相似，但血清HBV DNA水平突变株感染组较低。
结论：我们成功构建了rtA181T/sW172突变株的小鼠复制模型。我们的研究表明，这个突变株能够损害血清HBsAg的分泌、降低血清HBV DNA水平，但它在肝脏组织中的转录和复制能力得到增强。本研究为973资助项目（No.2007CB512902）。
