方法 （1）分别加/不加外源性TGF-β1（10ng/ml）诱导HSC-T6 2h，荧光定量PCR法检测TGF-β/Smad信号通路中各蛋白的表达情况。（2）荧光定量PCR法检测外源性TGF-β1诱导不同时间点Smad7 mRNA的表达情况。（3）将HSC-T6分别转染阴性对照质粒（ctrl）、siRNA-Smad3质粒（siRNA-Smad3），各组根据加或不加入外源性TGF-β1再分为（+）组和（-）组，荧光定量PCR法检测Smad3、Smad7 mRNA的表达。（4）Western印迹法分析外源性TGF-β1对不同时间点Smad3、Smad7蛋白表达的影响。
结果 （1）外源性TGF-β1对TGF-β/Smad信号通路中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4 、Smad6 mRNA的表达均无影响（均P＞0.05），但能诱导Smad7 mRNA的高表达（2.99±0.10，P＜0.05）。（2）外源性TGF-β1处理HSC-T6，Smad7 mRNA表达水平明显增高，于1h达峰值（3.90±1.10），为对照组的3.90倍，随后2h、4h、8h和24h开始逐渐下降，但其诱导Smad7的表达量与对照组相比仍有统计学意义（均P＜0.05）。（3）与阴性对照组（ctrl）相比，siRNA-Smad3组Smad3 mRNA 的表达明显下降（0.685±0.202，P＜0.05），同时siRNA-Smad3（-）Smad7 mRNA 的表达较ctrl（-）组也明显下降（0.773±0.223，P＜0.05）；siRNA-Smad3（+）组Smad7 mRNA的表达较ctrl（+）组明显下降（P＜0.05）。（4） 不同时间点细胞内Smad3蛋白表达水平均无明显变化（均 P＞0.05）；TGF-β1诱导1h后，细胞内Smad7的蛋白表达最高（P＜0.05）。
结论 外源性TGF-β1可诱导Smad7的高表达，但不影响Smad3的表达； Smad3是TGF-β1 诱导Smad7表达的关键调节因子 ，TGF-β1通过活化Smad3调节Smad7的表达。
（摘自2012中国消化系疾病学术大会论文集）
